CD34 Count Kit / discontinuation Набор для количественной оценки CD34 клеток

discontinuation

Набор реагентов для достоверной оценки абсолютного количества жизнеспособных CD34 клеток

Подходит для воспроизведения ISHAGE протокола
Оценка одновременно всех параметров в одной пробирке
Высокая точность
Легкость интерпретации
Для in vitro диагностики методом проточной цитометрии

Актуальность

Трансплантация гемопоэтических клеток используются для лечения злокачественных заболеваний крови и генетических нарушений. Изначально костный мозг являлся единственным источником для пересадки гемопоэтических клеток, однако, за последнее десятилетие широкое распространение получило использование периферических стволовых клеток крови для восстановления гематопоэза. Успех трансплантации в первую очередь зависит от общего количества CD34+ клеток в донорском материале. Традиционным является определение CD34 клеток с использованием гемоцитометра для подсчета количества лейкоцитов, и анализ на проточном цитофлюориметре для определения содержания CD34 клеток относительно количества лейкоцитов (более подробно метод описан во вложении и в указанных ссылках).

Набор CD34 Count kit позволяет оценить абсолютное количество CD34 положительных клеток в образцах периферической крови пациентов после мобилизации и в продуктах лейкофереза с использованием только проточной цитометрии.

Определение содержания CD34+ клеток

Поскольку проточная цитометрия обеспечивает одновременный анализ количественных и качественных характеристик CD34+ клеток, этот метод стал важнейшим для “on-line” мониторинга выхода CD34+ клеток и для определения оптимального времени для заготовки трансплантата.

Однако количество CD34+ клеток, подсчитываемых с помощью проточной цитометрии, может значительно отличаться в зависимости от стратегии гейтирования, используемых моноклональных антител, флюорохромов и лизирующих растворов. Поэтому, стандартизация измерений на проточном цитометре очень важна для получения достоверных и сопоставимых результатов.

Попытки стандартизировать подсчет CD34+ клеток привели к созданию нескольких рекомендаций, таких как Milan, Nordic и ISHAGE. На сегодняшний день, «золотым стандартом» большинство пользователей признают протокол ISHAGE.

Набор для достоверного определения абсолютного количества жизнеспособных CD34+ клеток

Для точного, достоверного и воспроизводимого определения количества CD34+ клеток, компанией Dako разработан набор CD34 Count Kit, который совместим с протоколом ISHAGE.

Набор обеспечивает выполнение четырех параметровой стратегии вышеуказанного протокола и включает два антитела, анти-человеческий CD34 и анти-человеческий CD45. Кроме того, он содержит CytoCount, суспензию флюоресцентных микросфер, которые используются в качестве референсной популяции для подсчета абсолютных значений CD34+.

В дополнении, набор содержит EasyLyse, не требующий отмывки и фиксации, аммониум хлоридный реагент для лизиса эритроцитов, а так же раствор для определения жизнеспособности 7-аминоактиномицин D (7-AAD), который позволяет исключить мертвые клетки из анализа.

* - 7-амино-актиномицин D (7-AAD) – это готовый к использованию краситель нуклеиновых кислот, который может быть использован вместо пропидий йодида для исключения из анализа мертвых клеток при исследовании методом проточной цитометрии. Возможность использования 7-AAD в сочетании с моноклональными антителами, меченными RPE и FITC, является преимуществом данного красителя по сравнению с пропидий йодидом, так как перекрывание спектров эмиссии 7-AAD, RPE, FITC минимально. Флюоресценция 7-AAD измеряется в красном диапазоне спектра.

Высокая точность

Следующие особенности CD34 Count Kit способствуют повышению точности измерений количества жизнеспособных CD34+ клеток:

отсутствие процедур отмывки и фиксирования образца для уменьшения клеточной потери
идентификация и подсчет жизнеспособных CD34+ клеток с помощью раствора 7-аминоактиномицина D

Оптимальность процедуры анализа

Поскольку при работе с CD34 Count Kit используется протокол ISHAGE, это позволяет оптимизировать анализ за счет:

уменьшения объема образца
снижения трудоемкости
уменьшения стоимости исследования по сравнению с традиционным

Простота в использовании

CD34 Count Kit очень прост в применении (содержит подробные инструкции). Флаконы пронумерованы в соответствии с порядком использования.

Набор был создан и оптимизирован согласно рекомендациям ISHAGE для проточной цитометрии.

Основные этапы пробоподготовки:

1. Добавьте 100 мкл образца в тест-пробирку.
2. Внесите 10 мкл смеси антител (анти-CD45/FITC+ анти-CD34/RPE) и инкубируйте в течении 15 минут.
3. Добавьте 2 мл EasyLyseTM (лизирующий раствор) и инкубируйте 10 минут.
4. Добавьте 10 мкл 7-AAD и инкубируйте 5 минут
5. Добавьте 100мкл CytoCount (референсные частицы), перемешайте пипетированием.
6. Анализируйте на проточном цитометре и определите абсолютное количество жизнеспособных CD34+ клеток, используя протокол гейтирования ISHAGE.

Подробности пожалуйста смотрите в инструкции к К2370

Дополнительные материалы

Листовка Dako CD34 Count Kit на английском языке

Инструкция к набору CD34 Count Kit

Информация для заказа:

Область использования: Диагностические наборы для проточной цитометрии	Производство:	Dako
	Метод:	Проточная цитометрия
	Объем:	50 duplicate тестов
	Кат. номер:	K237011
Цена (с НДС 10%):		В корзину
Наименование: CD34 Count Kit / discontinuation Набор для количественной оценки CD34 клеток. Примечание: discontinuation Набор реагентов для достоверной оценки абсолютного количества жизнеспособных CD34+ клеток дополнительная информация (на английском языке). Leukapheresis sample. CD45/FITC vs. CD34/RPE. R6 is set around the CytoCount™ Beads. The red population is the CD34+ stem cells.